Molecular and proteomic identification of Arthrobacter gandavensis isolated from cows with subclinical mastitis in a dairy farm

Aims@#The genus Arthrobacter is a pleomorphic and heterogeneous Gram-positive bacteria mainly isolated from the soil, only two species of Arthrobacter have been reported worldwide as pathogens of veterinary importance. This paper aims to report the isolation and identification of the Arthrobacter gandavensis from cows with subclinical mastitis at a dairy farm in the savanna of Bogotá, Colombia.@*Methodology and results@#A total of 209 milk and skin samples were taken from cows with and without subclinical mastitis, nasal swabs from workers and the environment. All samples were cultured in blood and MacConkey agar and identified by 16S rRNA gene sequencing and mass spectrometry MALDI TOF-MS. From the isolates identified, 33 corresponded to Staphylococcus spp., nine to the Enterobacteriaceae family and seven from Arthrobacter spp. (only identified by MALDI-ToF MS). The A. gandavensis isolates were obtained from six different positive cows for the California mastitis test, all with a matching pattern corresponding to Arthrobacter gandavensis strain DSM N: 15046, isolated from milk from cows with subclinical mastitis in Belgium. Analysis of the 16S rRNA gene showed 100% genetic similarity with sequences of A. gandavensis previously reported in the NCBI databases.@*Conclusion, significance and impact of study@#The identification by MALDI-ToF-MS and molecular, as shown in this report, is important to provide data that allow us to approach the actual ecology of the opportunistic pathogens of subclinical mastitis, especially in regions where the infection is endemic.

Expression of icaA and icaD genes in biofilm formation in Staphylococcus aureus isolates from bovine subclinical mastitis

ABSTRACT: Staphylococcus spp. plays a significant role in the etiology of bovine mastitis. Staphylococcus aureus is considered the most important species due to the high prevalence and the difficulty of in vivo treatment that is related to the expression of virulence factors and biofilm formation. This study aimed to detect the phenotypic expression of the biofilm formation in 20 S. aureus isolated from bovine mastitis and to evaluate the expression and regulation of genes involved in its production. MALDI-TOF and phenogenotypic identification assays were performed to characterize the isolates. The phenotypic biofilm production and the presence of icaA and icaD and bap genes were evaluated. The Agr system was typified (agr I, agr II, agr III and agr IV) and its regulator (agr RNAIII) was detected. Furtherly, Real-time PCR (qPCR) was performed at chosen times to quantify the expression of icaA, icaD and hld genes in three selected isolates. All 20 strains were biofilm producers and most presented icaA and icaD genes. Only one isolate presented the bap gene. The agr gene type II showed a prevalence of 70%. Transcriptional analysis revealed increased expression of ica genes at eight hours of growth. These results confirm that polysaccharides production mediated by the icaADBC operon genes is an essential mechanism to the biofilm formation and contributes to the early stages of bacterial growth.

RESUMO: Staphylococcus spp. desempenham um papel significativo na etiologia da mastite bovina. Staphylococcus aureus é considerada a espécie mais importante devido a alta prevalência e a dificuldade de tratamento in vivo que está relacionado à expressão dos fatores de virulência e formação de biofilme. Este estudo teve como objetivo detectar a expressão fenotípica da formação de biofilme em 20 cepas de S. aureus isoladas de mastite bovina e avaliar a expressão e regulação de genes envolvidos em sua produção. MALDI-TOF e ensaios de identificação fenogenotípica foram realizados para caracterizar os isolados. A produção fenotípica de biofilme e a presença dos genes icaA, icaD e bap foram avaliadas. O sistema Agr foi tipificado (agr I, agr II, agr III e agr IV) e seu regulador (agr RNAIII) foi detectado. Além disso, a PCR em tempo real (qPCR) foi realizada nos tempos determinados para quantificar a expressão dos genes icaA, icaD e hld em três isolados selecionados. Todas as 20 linhagens foram produtoras de biofilme e a maioria apresentava os genes icaA e icaD. Apenas um isolado apresentou o gene bap. O gene agr do tipo II mostrou uma prevalência de 70%. A análise transcricional revelou aumento da expressão de genes ica às oito horas de crescimento. Estes resultados confirmam que a produção de polissacarídeos mediada pelos genes do operon icaADBC é um mecanismo essencial para a formação do biofilme e contribui para os estágios iniciais do crescimento bacteriano.

Expression of icaA and icaD genes in biofilm formation in Staphylococcus aureus isolates from bovine subclinical mastitis / Expressão dos genes icaA e icaD na formação de biofilme em isolados de Staphylococcus aureus de mastite subclínica bovina

Staphylococcus spp. plays a significant role in the etiology of bovine mastitis. Staphylococcus aureus is considered the most important species due to the high prevalence and the difficulty of in vivo treatment that is related to the expression of virulence factors and biofilm formation. This study aimed to detect the phenotypic expression of the biofilm formation in 20 S. aureus isolated from bovine mastitis and to evaluate the expression and regulation of genes involved in its production. MALDI-TOF and phenogenotypic identification assays were performed to characterize the isolates. The phenotypic biofilm production and the presence of icaA and icaD and bap genes were evaluated. The Agr system was typified (agr I, agr II, agr III and agr IV) and its regulator (agr RNAIII) was detected. Furtherly, Real-time PCR (qPCR) was performed at chosen times to quantify the expression of icaA, icaD and hld genes in three selected isolates. All 20 strains were biofilm producers and most presented icaA and icaD genes. Only one isolate presented the bap gene. The agr gene type II showed a prevalence of 70%. Transcriptional analysis revealed increased expression of ica genes at eight hours of growth. These results confirm that polysaccharides production mediated by the icaADBC operon genes is an essential mechanism to the biofilm formation and contributes to the early stages of bacterial growth.(AU)

Staphylococcus spp. desempenham um papel significativo na etiologia da mastite bovina. Staphylococcus aureus é considerada a espécie mais importante devido a alta prevalência e a dificuldade de tratamento in vivo que está relacionado à expressão dos fatores de virulência e formação de biofilme. Este estudo teve como objetivo detectar a expressão fenotípica da formação de biofilme em 20 cepas de S. aureus isoladas de mastite bovina e avaliar a expressão e regulação de genes envolvidos em sua produção. MALDI-TOF e ensaios de identificação fenogenotípica foram realizados para caracterizar os isolados. A produção fenotípica de biofilme e a presença dos genes icaA, icaD e bap foram avaliadas. O sistema Agr foi tipificado (agr I, agr II, agr III e agr IV) e seu regulador (agr RNAIII) foi detectado. Além disso, a PCR em tempo real (qPCR) foi realizada nos tempos determinados para quantificar a expressão dos genes icaA, icaD e hld em três isolados selecionados. Todas as 20 linhagens foram produtoras de biofilme e a maioria apresentava os genes icaA e icaD. Apenas um isolado apresentou o gene bap. O gene agr do tipo II mostrou uma prevalência de 70%. A análise transcricional revelou aumento da expressão de genes ica às oito horas de crescimento. Estes resultados confirmam que a produção de polissacarídeos mediada pelos genes do operon icaADBC é um mecanismo essencial para a formação do biofilme e contribui para os estágios iniciais do crescimento bacteriano.(AU)

Relationship of Serum Concentrations of Calcium, Beta-hydroxybutyrate and Glucose to the Occurrence of Mammary and Uterine Disorders during Early Lactation on Dairy Cattle / Relación entre la concentración sérica de calcio, beta-hidroxibutirato y glucosa y la ocurrencia de trastornos mamarios y uterinos durante la lactancia temprana en ganado lechero

Abstract This study aimed to relate the serum levels of energy indicators (glucose and beta-hydroxybutyrate) and calcium to the occurrence of uterine and mammary diseases in the transition period of Holstein cows. One hundred and fifteen Holstein cows from a commercial herd were monitored starting one week before calving and during the first 2 weeks after calving. The presence of subclinical mastitis was monitored for 3 weeks postpartum using the California Mastitis Test (CMT) and somatic cell counting. Positive samples of subclinical mastitis were analyzed for bacterial identification. Clinical mastitis was monitored for 6 weeks postpartum, using data that were recorded by the farmer based on some established definitions. The presence of uterine disorders was identified for 3 weeks postpartum by clinical examination. Blood collections were made from all cows for determining calcium, glucose, and β-hydroxy-butyrate (BHB) the week before calving and twice during the postpartum (days 5 and 15 postpartum). A group of 70 healthy cows was used as control. Clinical mastitis was identified in 20% of the cows, subclinical mastitis in 10.4% and clinical metritis in 8.7% of the cows. The bacterial agents with the highest occurrence in subclinical mastitis cases were coagulase-negative Staphylococcus and Streptococcus. No relationships were observed between any of the biochemical metabolite studied and the uterine and mammary diseases in the cows during the studied period.

Resumen Este estudio tuvo por objetivo relacionar valores séricos de indicadores energéticos (glucosa y beta-hidroxibutirato) y calcio con la ocurrencia de trastornos uterinos y mamarios durante el periodo de transición en vacas holstein. Ciento quince vacas holstein de un rebaño comercial fueron monitoreadas en la semana previa al parto y durante las primeras dos semanas después del parto. La presencia de mastitis subclínica fue monitoreada por tres semanas posparto mediante la prueba de mastitis California (CMT) y conteo de células somáticas. Las muestras positivas a mastitis subclínica fueron analizadas para identificación bacteriana. La mastitis clínica fue monitoreada durante seis semanas posparto, usando datos registrados en el rebaño. La presencia de trastornos uterinos fue identificada durante tres semanas posparto mediante examen clínico. Se realizaron muestras de sangre de todas las vacas para determinar calcio, glucosa y β-hidroxibutirato la semana anterior al parto y dos veces en el posparto (días 5 y 15). Un grupo de 70 vacas sanas fue usado como control. Un 20% de las vacas presentó mastitis clínica, el 10,4% mastitis subclínica y el 8,7% metritis clínica. Los agentes bacterianos con mayor ocurrencia en los casos de mastitis subclínica fueron Staphylococcus coagulasa-negativos y Streptococcus. No se observó relación de ninguno de los metabolitos bioquímicos con los trastornos uterinos o mamarios en las vacas durante el periodo estudiado.

Prevalencia de mastitis subclínica en tambo lechero en Paraguay / Prevalence of Subclinical Mastitis in Dairy Farm in Paraguay

Resumen El presente trabajo de investigación se llevó a cabo en un tambo del distrito de Nueva Italia, situado en el departamento Central. El objetivo de la investigación fue determinar la prevalencia de mastitis subclínica. Para el efecto, se contó con 147 animales de la especie bovina, hembras de razas holando, cruces jersey-holando y holando-gyr, de diferentes edades y periodos de lactación, con y sin síntomas de mastitis. Se realizó la prueba California Mastitis Test (CMT) y, de las 147 muestras analizadas, 110 dieron positivo a mastitis subclínica, lo que representa una prevalencia de 74,83 %. De los 551 cuartos estudiados, 315 fueron positivos, equivalentes al 57 %. Los cuartos posteriores resultaron ser el 50,6% de los cuartos totales. Según grados de CMT los resultados fueron: negativo, 43 % (236); trazas, 17 % (91); grado 1, 25 % (138); grado 2: 13,7 % (76), y grado 3: 1,8 % (10). La merma fue de 129,6 litros de leche por ordeñe. Teniendo en cuenta que el precio por litro de leche es Gs 2300 (USD 0,35), el total fue de Gs 298 080 (USD 45,6), que representa el 8,6 % de pérdida.

Abstract This research work was conducted in a dairy farm in the Nueva Italia district, located in the Central Province. The research aimed to determine the prevalence of subclinical mastitis therein. To do so, 147 female bovine subjects were studied, including Holstein specimens, Jersey-Holstein crossbreeds, and Holstein-Gyr crossbreeds, with different ages and lactation periods. There were both symptomatic and asymptomatic animals. A California Mastitis Test (CMT) was applied and out of the 147 sampled animals, 110 resulted positive to the disease, accounting for a prevalence of 74.83%. Out of the 551 studied rooms, 315 were positive, accounting for 57%. The rooms in the backside accounted for 50.6% of the total positive rooms. Based on the CMT grades, the results were as follows: negative, 43% (236); traces, 17% (91); grade 1.25% (138); grade 2: 13.7% (76), and grade 3: 1.8% (10). There was a decrease of 129.6 liters milk per milking session. Considering that per-liter price is Gs 2300 (USD 0.35), the total loss of the milk was Gs 298,080 (USD 45.6), equaling 8.6% of profit loss.

In vitro Efficacy of Emblica officinalis Against MRSA Isolated from Buffaloes Suffering from Subclinical Mastitis

The present study describes in- vitro efficacy of Emblica officinalis against Methicillin Resistant S. aureus mastitis. Diffusion technique was used to assess in-vitro efficacy of Emblica officinalis. Zone of inhibition was measured and used to compare the in-vitro efficacy. The zone ranged between 10-13 mm with maximum zone of 13 mm observed in 200 and 225 mg/ml DMSO disc, followed by 12 mm in 175 and 150 mg/ml DMSO disc, 11 mm in 125 mg/ml DMSO disc and 10 mm in 100 mg/ml DMSO disc. The results indicate that the sensitivity pattern for Emblica officinalis at 200 & 175 mg/ml DMSO concentration and was comparable with the standard antibiotics in Methicillin sensitive S. aureus. In Methicillin resistant S. aureus isolates, the zone of inhibition was in the order Oxytetracycline (15mm) followed by Emblica officinalis -200 (13 mm) and Methicillin, ampicillin, gentamicin, ofloxacin were resistance

Detection of Enterotoxin Genes (seg, seh and sei) in Staphylococcus aureus Milk Isolates from Cow with Subclinical Mastitis

Enterotoxigenic Staphylococcus aureus can be isolated from various sources and are responsible for food poisoning in addition to many suppurative infections. In the present study, from 82 physically normal milk samples from cattle subclinical mastitis 33(40.24%) were isolated to S. aureus. Out of these, 22 (66.66%) S. aureus isolates had either one or more enterotoxin genes. Both seg and sei enterotoxin genes were carried by 19 (57.5%) S.aureus isolates while only three (9.09%) isolates were positive for seh gene. This study showed the evidence of presence of enterotoxin genes seg, seh, and sei in S. aureus isolates from subclinical mastitis. The presence of these enterotoxigenic S. aureus strains in milk indicates potential public health concern

Frequency of microorganisms isolated at different stages of lactation and milk production loss associated with somatic cell count and to mastitis-causing pathogens / Frequência de microrganismos isolados em diferentes fases da lactação e perda de produção de leite associada à contagem de células somáticas e aos patógenos causadores de mastite

The aim of this study was to evaluate the frequency of isolation of agents causing subclinical mastitis in a herd and to estimate production losses associated with SCC> 200,000cells/mL. Three 7-day interval microbiological cultures were performed in all lactating animals from the same farm that was evaluated from June to July. To evaluate the negative and positive isolation frequencies between the lactation phases, a Chi-square test was performed. Simple linear regressions were performed to evaluate the lactation curve of animals grouped by pathogens isolated from negative cows in the microbiological culture and with SCC <200,000cells/mL. To estimate the production losses between the groups, regression coefficients were used. Results found in this experiment were: Culture-negative cows with SCC ≥ 200,000cells/mL, cows testing positive in milk culture, with SCC <200,000cells/mL and cows testing positive in milk culture, with SCC ≥ 200,000cells/mL. Milk production was -3.5; -0.5 and -4.27kg, respectively, when compared to culture-negative cows with SCC <200,000cells/mL. Cows infected with yeast cells, Coagulase-negative staphylococci (CNS), Staphylococcus aureus and environmental streptococci produced -3.42; -0.5; -0.168 and -2.5kg of milk when compared to culture-negative cows with SCC <200,000cells/mL. SCC indicates an inflammatory reaction in the mammary gland and it is directly associated with milk production losses and with presence of microorganisms in the mammary gland.(AU)

O objetivo deste estudo foi avaliar a frequência de isolamento de agentes causadores de mastite subclínica em um rebanho e estimar as perdas de produção associadas com CCS>200.000 cél./mL. Três cultivos microbiológicos intervalados por sete dias foram realizados em todos os animais em lactação da propriedade avaliada, no período de junho a julho. Para avaliar as frequências de isolamento negativo e positivo entre as fases da lactação, foi realizado um teste de qui-quadrado. Foram realizadas regressões lineares simples para avaliar a curva de lactação dos animais agrupados por patógenos isolados em relação a vacas negativas na cultura microbiológica e com CCS < 200.000 cél./mL. Os coeficientes das regressões foram utilizados para estimar as perdas de produção entre os grupos. Vacas com resultado negativo na microbiologia, mas com CCS ≥ 200.000 cél./mL, positivas na microbiologia com CCS < 200.000 cél./mL e positivas com CCS ≥ 200.000 cél./mL, produziram por dia, respectivamente, -3,5; -0,5 e -4,27kg de leite em relação às vacas negativas com CCS < 200.000 cél./mL. Vacas infectadas com células leveduriformes, Staphylococcus coagulase negativa, Staphylococcus aureus e Streptococcus ambientais produziram, respectivamente, -3,42; -0,5; -0,168 e -2,5kg de leite, comparadas a vacas negativas com CCS < 200.000 cél./mL. A CCS, indicativa de reação inflamatória, encontra-se diretamente associada às perdas de produção de leite, assim como a presença do microrganismo na glândula mamária.(AU)

Evaluación de la calidad composicional, microbiológica y sanitaria de la leche cruda en el segundo tercio de lactancia en vacas lecheras / Evaluation of the compositional, microbiological and sanitary quality of raw milk in the second third of lactation in dairy cows

RESUMEN Introducción: Uno de los parámetros más importantes asociados a la producción de leche y su transformación es contar con condiciones higiénico-sanitarias adecuadas que permitan mejorar las condiciones del productor y empresas transformadoras y, por ende, garantizar inocuidad alimentaria al consumidor garantizando su bienestar y salud. Objetivo: Se evaluaron características composicionales, microbiológicas y sanitarias de leche cruda durante el segundo tercio de lactancia en vacas lecheras. Materiales y métodos: Se tomaron muestras de leche por duplicado cada 10 días a siete vacas lecheras durante su segundo tercio de lactancia. Posteriormente, se realizaron las siguientes pruebas: análisis composicional, adulterantes, presencia de antibióticos, recuento de células somáticas (RCS/ ml), identificación de Staphylococcus aureus y antibiograma por el método de Kirby-Bauer. Resultados: Se detectó la presencia de Staphylococcus aureus en el 66,2% de las muestras y 4,6% resultaron positivas para Listeria sp. No hubo presencia de antibióticos, peróxidos y almidones. Se evidenciaron muestras positivas para cloruros y neutralizantes, además se determinó que por cada kilogramo de leche se obtiene 30, 25 y 84 g de proteína, caseína y sólidos no grasos (SNG), respectivamente; donde la caseína representó el 83% de la proteína. Para el caso del RCS/ml se encontraron valores superiores a un millón de RCS/ml. Conclusiones: Para el caso estudiado la calidad composicional, sanitaria y microbiológica de la leche cruda en el segundo tercio de lactancia en vacas lecheras no es adecuada debido a que se obtuvieron valores que sobrepasan algunos lineamientos de la Norma Técnica Colombiana (NTC) 399 de 2002, en la cual se establece un conteo de mesófilos y de células somáticas (RCS/ml) máximo de 700.000/ml de leche cruda, a partir del cual se debe descartar el consumo de leche o su transformación.

ABSTRACT Introduction: One of the most important parameters associated with the production of milk and its transformation, is to have adequate hygienic-sanitary conditions in terms of milk quality that allow improving the conditions of the producer and processing companies, and therefore to provide food safety to the consumers, guaranteeing their well-being and health. Objetive: Compositional, microbiological and sanitary characteristics of raw milk were evaluated during the second third of lactation in dairy cows. Materials and methods: Two milk samples were taken every 10 days from 7 dairy cows during their second third of lactation. Then the following tests were carried out: compositional analysis, adulterants, presence of antibiotics, somatic cell count (SCC/mL), identification of Staphylococcus aureus and antibiogram by the Kirby-Bauer method. Results: Staphylococcus aureus was evidenced in 66.2% of the samples, and 4.6% of them gave positive for Listeria sp. No traces of antibiotics, peroxides and starches were found. Positive samples were found for chlorides and neutralizers, and it was determined that for each kilogram of milk, 30, 25 and 84 grams of protein, casein and non-fatty solids (NFS) were obtained, with 83% of the protein formed by casein. In the case of SCC/mL, values higher than one million SCC/mL were found. Conclusions: The compositional, sanitary and microbiological quality of the studied raw milk in the second third of lactation in dairy cows was not adequate, because values found lied above the Colombian technical standard 399 of 2002, which establishes a maximum of mesophile and somatic cell count (SCC/ mL) of 700000/ml in raw milk, therefore not allowing its consumption and transformation.

Rapid identification of bovine mastitis pathogens by MALDI-TOF Mass Spectrometry / Rápida identificação de agentes causadores de mastite por espectrometria de massas MALDI-TOF

Matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) has been shown to be an alternative method for identification of bacteria via their protein profile spectra, being able to identify bacteria at the genus, species and even at subspecies level. With the aim of large-scale identification of pathogens causing mastitis by this platform, a total of 305 isolates of bacteria identified from cows with subclinical mastitis were analyzed by conventional microbiological culture (MC) as well as by MALDI-TOF MS coupled with Biotyper data processing. Approximately 89% of the identifications performed by MALDI-TOF MS were consistent with results obtained by MC. From the remaining isolates (11%), 6.3% of isolates were classified as misidentified (discordance for both genus and species level), and 4.7% showed identification agreement at the genus level but not at the species level, being classified as unidentified at species level. The disagreement results were mostly associated with identification of Streptococcus and Enterococcus species probably due to the narrow phenotypic similarity between these two genera. These disagreement results suggest that biochemical assays might be prone to identification errors and, MALDI-TOF MS therefore may be an alternative to overcome incorrect species-specific identification. Standard microbiological methods for bovine mastitis diagnosis are time consuming, laborious and prone to errors for some bacteria genera. In our study, we showed that MALDI-TOF MS coupled with Biotyper may be an alternative method for large-scale identification of bacteria isolated from milk samples compared to classical microbiological routine protocols.(AU)

A espectrometria de massas (MALDI-TOF MS) tem mostrado ser um método alternativo para a identificação de bactérias, sendo capaz de identificar as bactérias causadoras de mastite em gênero, espécie ou até mesmo subespécie. Com o objetivo de identificar os patógenos causadores de mastite em grande-escala por esta plataforma, um total de 305 isolados bacterianos oriundos de vacas com mastite subclínica foram analisados pela cultura microbiológica convencional (CM) e pela MALDI-TOF MS acoplada ao software Biotyper. Aproximadamente 89% das identificações realizadas pela MALDI-TOF MS foram consistentes com os resultados obtidos pela CM. Do restante de isolados bacterianos (11%), 6,3% foram classificados como identificação errônea (discordância de gênero e espécie), e 4,7% apresentaram concordância de gênero, mas discordância da espécie. Os resultados que apresentaram divergência estavam mais associados com a identificação das espécies de Streptococcus spp. e Enterococcus spp. devido à similaridade fenotípica entre os dois gêneros. Estes resultados divergentes sugerem que os ensaios bioquímicos podem ser propensos a erros de identificação, por isso a MALDI-TOF MS pode ser considerada um método alternativo para superar os erros de identificação da CM. A cultura microbiológica padrão e os ensaios bioquímicos utilizados na identificação de agentes causadores de mastite são demorados, trabalhosos e propensos a erros quando utilizados na identificação em nível de espécie. No presente estudo, demonstramos que a MALDI-TOF MS acoplada ao software Biotyper pode ser considerada um método alternativo de identificação de bactérias causadoras de mastite em grande-escala quando comparado com a cultura microbiológica convencional.(AU)

Microorganismos aislados en cultivo bacteriológico de muestras de leche de vacas holstein clínicamente sanas / Microorganisms isolated in bacteriological culture from milk samples from clinically healthy holstein cows / Microrganismos isolados em cultivo bacteriológico de amostras do leite de vacas holandesas clinicamente saudáveis

Resumen El objetivo del presente estudio fue determinar la frecuencia de aislamiento de microorganismos de tipo infeccioso y ambiental en leche de un grupo vacas clínicamente sanas en dos diferentes tipos de ordeño. Para ello se utilizaron muestras de leche de 289 vacas ubicadas en hatos de cuatro municipios del Norte del departamento de Antioquia en diferentes sistemas de ordeño (manual y mecánico), a cada muestra de leche se le hizo cultivo bacteriológico para determinar la presencia de microorganismos. De 289 muestras de leche evaluadas, 193 (66,78%) fueron positivas para aislamiento de cualquier tipo de patógeno (ocho diferentes patógenosaislados), de las cuales 81 (28,02%) muestras provenían de ordeño manual y 112 (38,75%) pertenecían a ordeño mecánico, encontrando un mayor porcentaje de aislamiento de patógenos bacterianos en muestras de leche provenientes de sistema de ordeño mecánico (p=0,0236). El patógeno de mayor aislamiento fue el Arcanobacterium haemolyticum (antes clasificado como Corinebacterium sp), microorganismo que hace parte de la flora saprófita del animal, con presencia de manera individual en el 20,14% de las muestras analizadas y en confección con otros patógenos en 0,7% de las muestras. El microorganismo que siempre se reporta como mayor productor de mastitis subclínica en bovinos es el Streptococcus agalactiae, un patógeno infeccioso, que en el presente estudio se aisló del 12,50% de las muestras de leche. Se determinó el Odds ratio (OR), entre aislamiento de Streptococcus agalactiae y Score de Células somáticas (SCS) que fue estadísticamente significativo, indicando que cuando está presente este patógeno el SCS aumenta y los animales son más susceptibles a padecer mastitis.

Abstract A microbiological analysis was performed to determine the frequency of isolation of microorganisms of infectious and environmental type in milk from a group of clinically healthy cows in two different types of milking (manual and mechanical). To each sample of milk was made bacteriological culture to determine the presence of microorganisms. Of 289 milk samples evaluated, 193 (66.78%) were positive for isolation of any type of pathogen, of which 81 (28.02%) samples came from manual milking and 112 (38.75%) belonged to mechanical milking, finding a higher percentage of isolation of bacterial pathogens in milks coming from mechanical milking system (p = 0.0236). The most isolated pathogen was the Arcanobacterium haemolyticum, A microorganism that forms part of the saprophytic flora of the animal, with an individual presence in 20.14% and in coinfection with other pathogens in 0.7% of the samples. The most common microorganism of subclinical mastitis in cattle is Streptococcus agalactiae, which in the present study was isolated from 12.50% of milk samples. The odds ratio (OR) between the isolation of Streptococcus agalactiae and the Somatic Cell Score (SCS) was determined, which was statistically significant, indicating that when this pathogen is present the SCS increases and the animals are more susceptible to mastitis.

Resumo O objetivo deste estudo foi determinar a frequência de isoLamento de microorganismos de tipo infecciosos e ambientaL no Leite de um grupo de vacas cLinicamente saudáveL em dois diferentes tipos de ordenha. Para este fim utiLizaram-se amostras do Leite de 289 vacas LocaLizadas em rebanhos de quatro municipaLidades do Norte de Antioquia com dois tipos diferentes de ordenha (manuaL e mecânica), a cada amostra do Leite foi feito um cuLtivo bacterioLógico para determinar a presença de microorganismos. De 289 amostras do Leite avaLiadas, 193 (66,78%) foram positivas para o isoLamento de quaLquer tipo de agente patogênico (oito diferentes agentes patogênicos isoLados), das quais 81 (28,02%) amostras eram de ordenha manuaL e 112 (38, 75%) foram de ordenha mecânica, encontrando uma maior percentagem de isoLamento dos agentes patogênicos bacterianos nos Leites provenientes do sistema de ordenha mecânica (p = 0,0236). O agente patogênico mais isoLado foi Arcanobacterium haemolyticum (Corinebacterium sp), microrganismo que faz parte da flora saprófita do animaL, presentes individuaLmente em 20,14% das amostras anaLisadas, e em reLação com outros agentes patogênicos o 0,7% das amostras. O microrganismo que sempre se reporta como o maior produtor de mastite subcLínica em gado é o Streptococcus agalactiae, um agente patogênico infeccioso, que neste estudo foi isoLado no 12,50% das amostras do Leite. Foi determinado o Odds ratio (OR) entre o isoLamento de Streptococcus agalactiae e Pontuação das céLuLas somáticas (SCS), e foi estatisticamente significativo, indicando que quando o agente patogênico está presente, o SCS aumenta e os animais são mais susceptíveis à mastite.

Tipologia de manejo de ordenha: análise de fatores de risco para a mastite subclínica / Typology of milking management: analysis of risk factors for subclinical mastitis

Apesar do volume de leite produzido, a qualidade da matéria-prima é um dos maiores entraves ao desenvolvimento tecnológico e à consolidação da indústria de laticínios no Brasil. Dentre os entraves, toma destaque a contagem de células somáticas do leite, que é o indicador mais usado em programas de controle e prevenção da mastite em todo o mundo. Com objetivo de identificar características no manejo de ordenha e quantificar fatores de risco que elevam a mastite subclínica e seus principais agentes causadores, realizou-se coleta de dados in loco em propriedades leiteiras na região Oeste do Paraná, coletas que consistiam na aplicação de dois questionários guia semi-estruturados, acompanhamento de uma ordenha e coleta de leite de três vacas que apresentassem o teste de CMT positivo. Com a utilização do método estatístico de análise de correspondência múltipla (ACM) chegou-se a um montante de 12 variáveis a serem estudadas e a formação das dimensões 1 e 2 com 28,54% e 21,06% da variância explicada respectivamente. Com a análise de classificação hierárquica ascendente permitiu reduzir o universo inicial de 112 vacas para quatro grupos homogêneos de produção (G1, G2, G3, G4). As características de manejo de ordenha: tipo de ordenha, secagem dos tetos antes da ordenha, tratamento para casos de mastite clínica, higiene das mãos do ordenhador e treinamento dos ordenadores foram identificados como fatores de risco para mastite subclínica com isolamento do agente Staphylococcus coagulase negativo, o qual foi o agente mais prevalente nos isolamentos microbiológicos das amostras de leite com mastite subclínica.(AU)

Despite the produced milk volume, its quality is one of the barriers for technological development and consolidation of the dairy industry in Brazil. Among the barriers is the milk somatic cell count, which is the indicator used in most control programs and prevention of mastitis. In order to identify characteristics in the management of milking and to quantify risk factors that increase subclinical mastitis and its main bacterial agents, data were collected in situ on dairy farms in western Paraná. The data collection consisted in the application of two questionnaires, in accompanying a milking procedure, and in collection of CMT positive milk samples from three cows. Using the statistical method of multiple correspondence analysis (MCA) we came to a total of 12 variables to be studied, and to the formation of dimension 1 and 2 with respectively 28.54% and 21.06% of the explained variance. With the hierarchical ascending classification analysis it was possible to reduce the initial population of 112 cows to produce four homogeneous groups (G1, G2, G3, G4). The milking handling characteristics, as type of milking, drying teats before milking, treatment for cases of clinical mastitis, milker's hand hygiene and as training of officers, were identified as risk factors for subclinical mastitis with isolation of a coagulase negative Staphylococcus, which was the most prevalent agent in milk samples of subclinical mastitis.(AU)

Diagnóstico de mastite e determinação da composição do leite de ovelhas laucane / Diagnosis of mastitis and determination of milk composition of laucane sheep

A cadeia produtiva da ovinocultura leiteira tem apresentado importância econômica crescente, especialmente na região Sul do Brasil e, por isto, a mastite nesta espécie vem sendo cada vez mais discutida. O objetivo deste estudo foi determinar a ocorrência de mastite e caracterizar a composição do leite de ovinos. Para tanto, 24 ovelhas Laucane foram avaliadas durante uma lactação, em uma unidade produtiva no Oeste Catarinense. Determinou-se que a concentração de matéria gorda variou de 2,2% a 11,5%, com aumento médio significativo ao longo da lactação; o teor proteico variou de 4,38 a 6,73%; a concentração de lactose variou de 2,9 a 4,6%, com redução significativa ao longo da lactação; e a concentração de sólidos variou de 16,7 a 19,5%. Embora nenhuma ovelha tenha apresentado quadro clínico de mastite, verificou-se crescimento bacteriano compatível com mastite subclínica em 12,3% das amostras de leite, com predomínio de Staphylococcus coagulase negativa (SCN) e resposta (três cruzes) ao California Mastitis Test (CMT), pelo menos uma vez durante a lactação, em 12,5% das fêmeas analisadas. Verificou-se grande variabilidade na Contagem de Células Somáticas - CCS (2,3x104 a 9,5x106 células.mL-1) entre os animais e entre os meses de lactação. Considerando- -se que a mastite ovina ainda não está amplamente conhecida, faz-se necessário o desenvolvimento de estudos que corroborem seu diagnóstico.

Uso de antimicrobiano nanoparticulado para o tratamento da mastite subclínica de ovelhas de corte no período seco / Use of nanoparticulated antimicrobians to treat subclinical mastitis of ewes during the dry period

A inflamação da glândula mamária é uma das principais causas de prejuízo na ovinocultura. Este estudo teve como objetivo investigar as taxas de cura do tratamento da mastite subclínica após infusão intramamária de princípio ativo antimicrobiano no momento da secagem, em formulações convencional e nanoparticulada. Os rebanhos estavam localizados em São Carlos, São Paulo, Brasil. Analisou-se um total de 584 glândulas mamárias de 307 ovelhas de aptidão para produção de carne. Triagem prévia dos casos subclínicos de mastite foi efetuada por meio do California Mastitis Test (CMT) e/ou da contagem de células somáticas (CCS). Análises microbiológicas foram realizadas para confirmação da etiologia infecciosa. As glândulas mamárias com mastite subclínica foram distribuídas em três grupos: G1 (Controle; glândulas mamárias que não receberam tratamento antimicrobiano); G2 (glândulas mamárias em que foi administrado 100 mg de cloxacilina benzatina em estrutura convencional) e G3 (glândulas mamárias em que foi administrado 50 mg de cloxacilina benzatina em estrutura nanoencapsulada). O tratamento aplicado ao G3 mostrou-se mais eficiente (P=0,047) na cura de glândulas mamárias com mastite subclínica. O uso da cloxacilina nanoencapsulada no momento da secagem de ovelhas de corte auxilia no controle da mastite subclínica infecciosa e reduz os prejuízos consequentes.(AU)

Inflammation of the mammary gland is one of the main causes of losses in sheep-rearing. This study aimed to investigate the cure rates from treating subclinical mastitis after intramammary infusion of active antimicrobial agents as conventional formulations or as nanoparticles, at the time when the ewes are being dried off. A total of 584 mammary glands in 307 ewes in meat-producing herds located in São Carlos, São Paulo, Brazil, were analyzed. Prescreening of subclinical mastitis cases was done using the California mastitis test (CMT) and/or the somatic cell count (SCC). Microbiological analyses were performed to confirm the infectious etiology. The mammary glands with subclinical mastitis were distributed into three groups: G1 (control; mammary glands that did not receive any antimicrobial treatment); G2 (mammary glands to which 100mg of benzathine cloxacillin in conventional form were administered); and G3 (mammary glands to which 50mg of benzathine cloxacillin in nanoparticulate form were administered). The treatment applied to G3 was more efficient (P=0.047) in curing mammary glands with subclinical mastitis. Use of cloxacillin nanoparticles at the time when the ewes are being dried off helps to control infectious subclinical mastitis and reduces consequential losses among meat-producing herds.(AU)

Prevalencia y sensibilidad a antibióticos de especies de estafilococos coagulasa negativos provenientes de mastitis subclínica en bovinos de tambos de la región central de Argentina / Prevalence and antibiotic susceptibility of coagulase-negative Staphylococcus species from bovine subclinical mastitis in dairy herds in the central region of Argentina

Coagulase-negative staphylococci (CNS) are a common cause of bovine subclinical mastitis (SCM). The prevalence of CNS species causing SCM identified by genotyping varies among countries. Overall, the antimicrobial resistance in this group of organisms is increasing worldwide; however, little information exists about a CNS species resistant to antibiotics. The aim of the present study was to genotypically characterize CNS at species level and to determine the prevalence and antibiotic resistance profiles of CNS species isolated from bovine SCM in 51 dairy herds located in the central region of the province of Cordoba, Argentina. In this study, we identified 219 CNS isolates at species level by PCR-restriction fragment length polymorphism of the groEL gene. Staphylococcus chromogenes (46.6%) and Staphylococcus haemolyticus (32%) were the most prevalent species. A minimum of three different CNS species were present in 41.2% of the herds. S. chromogenes was isolated from most of the herds (86.3%), whereas S. haemolyticus was isolated from 66.7% of them. The broth microdilution method was used to test in vitro antimicrobial susceptibility. Resistance to a single compound or two related compounds was expressed in 43.8% of the isolates. S. chromogenes and S. haemolyticus showed a very high proportion of isolates resistant to penicillin. Resistance to two or more non-related antimicrobials was found in 30.6% of all CNS. S. haemolyticus exhibited a higher frequency of resistance to two or more non-related antimicrobials than S. chromogenes.

Los estafilococos coagulasa negativos (ECN) son una causa frecuente de mastitis subclínica (MSC) en bovinos. La prevalencia de especies de ECN causantes de MSC identificadas por métodos genotípicos varía entre países. La resistencia antimicrobiana en este grupo de organismos se está incrementando en el mundo; sin embargo, existe poca información acerca de las especies de ECN resistentes a antibióticos. Los objetivos del presente estudio fueron caracterizar genotípicamente los ECN a nivel de especie y determinar la prevalencia y los perfiles de resistencia a antibióticos de las especies de ECN aisladas de MSC en bovinos de 51 rodeos situados en la provincia de Córdoba, Argentina. Mediante polimorfismos de los fragmentos de restricción del gen groEL identificamos 219 aislamientos de ECN a nivel de especie. Staphylococcus chromogenes (46,6%) y Staphylococcus haemolyticus (32%) fueron las especies más prevalentes. Un mínimo de 3 especies diferentes de ECN estuvieron presentes en el 41,2% de los tambos. S. chromogenes fue aislado en la mayoría de los tambos (86,3%), mientras que S. haemolyticus fue aislado en el 66,7% de aquellos. Para el análisis de sensibilidad a los antimicrobianos in vitro se usó el método de microdilución en caldo. La resistencia a un único compuesto o a 2 compuestos relacionados fue expresada en el 43,8% de los aislamientos. S. chromogenes y S. haemolyticus mostraron una muy elevada proporción de aislamientos resistentes a penicilina. La resistencia a 2 o más antimicrobianos no relacionados fue hallada en el 30,6% de los ECN. S. haemolyticus exhibió una frecuencia de resistencia a 2 o más antimicrobianos no relacionados más elevada que S. chromogenes.

Frecuencia y susceptibilidad antimicrobiana del estafilococo coagulasa negativo aislado de mastitis bovina en fincas lecheras del Tolima, Colombia / Frequency and Antimicrobial Susceptibility of Coagulase-negative Staphylococci Isolated from Bovine Mastitis in Dairy Farms from Tolima, Colombia / Frequência e susceptibilidade antimicrobiana do estafilococo coagulase negativo isolado de mastite bovina em fazendas produtoras de leite do Tolima, na Colômbia

Objetivo: Determinar la presencia y susceptibilidad antimicrobiana del grupo estafilococo coagulasa negativo (ECN) en algunas fincas ganaderas de Tolima, Colombia. Materiales y métodos: Mediante la prueba de California para el diagnóstico de mastitis (CMT), se evaluaron 484 cuartos pertenecientes a 121 vacas de cinco fincas ganaderas de pequeña producción de una región del centro de Tolima. Las muestras positivas al CMT se cultivaron para aislamiento bacteriológico. A los ECN encontrados se les realizaron pruebas de susceptibilidad frente a los antibióticos. Los resultados se analizaron con estadística descriptiva. Resultados: 252 (52%) cuartos no presentaron ningún tipo de reacción al CMT, ni signos clínicos de mastitis, por lo cual se consideraron libres de la enfermedad. De los cuartos, 73 (15%) fueron positivos para CMT y cultivo bacteriológico. De estos se aislaron 36 cepas de ECN (7,4% del total de cuartos); S. aureus-ECP, 28 (5,8%); Streptococcus spp., 6 ( 1,2%); Escherichia coli, 2 (0,4%), y Klebsiella pneumoniae, 2 (0,2%). La mastitis clínica y subclínica en el cuarto se presentó en 1,4% y 13,6%, respectivamente. En 5 (1,0%) de los cuartos se encontró mastitis clínica causada por ECN y mastitis subclínica en 31 (6,4%). El 61% de las cepas de ECN fue resistente a penicilina, y el 58%, a tetraciclina; el 97% fue sensible a cefoperazona. Conclusión: El grupo ECN, considerado un emergente mundial de mastitis, es evidenciado con alta frecuencia en fincas ganaderas de Tolima, Colombia, lo que causa mastitis clínica y subclínica con variada respuesta a los antimicrobianos.

Objective: To determine the antimicrobial presence and susceptibility of the coagulase-negative staphylococci group (ECN, for its initials in Spanish) in some cattle farms from Tolima, Colombia. Materials and methods: Using the California test for the diagnosis of mastitis (CMT, for its initials in Spanish), 484 quarters belonging to 121 cows from five small production ranches from a region of central Tolima were evaluated. CMT positive samples were cultivated for bacterial isolation. The ECN found were tested for susceptibility to the antibiotics. The results were analyzed with descriptive statistics. Results: 252 (52%) quarters did not show any type of reaction to the CMT, nor did they show any clinical signs of mastitis, therefore they were considered free of the disease. From the quarters, 73 (15%) turned positive for CMT and bacteriological culture. From these, 36 strains of ECN were isolated (7.4% of the total of quarters); S. aureus-ECP, 28 (5.8%); Streptococcus spp., 6 (1.2%).; Escherichia coli, 2 (0.4%), and Klebsiella pneumoniae, 2 (0.2%). The clinical and subclinical mastitis in the quarter occurred in 1.4% and 13.6%, respectively. In 5 (1.0%) of the quarters, clinical mastitis caused by ECN was found and subclinical mastitis in 31 (6.4%). 61% of the ECN strains were resistant to penicillin, and 58%, to tetracycline; 97% were sensitive to cefoperazone. Conclusion: The ECN group, considered a global emergent of mastitis, is evidenced with high frequency in ranches from Tolima, Colombia, causing clinical and sub-clinical mastitis with varied response to antimicrobials.

Objetivo: Determinar a presença e susceptibilidade antimicrobiana do grupo estafilococo coagulase negativo (ECN) em algumas fazendas de gado do Tolima, na Colômbia. Materiais e métodos: Mediante a prova de Califórnia para o diagnóstico de mastite (CMT), se avaliaram 484 quartos pertencentes a 121 vacas de cinco fazendas de gado de pequena produção de uma região do centro do Tolima. As amostras positivas ao CMT se cultivaram para isolamento bacteriológico. Aos ECN encontrados foram-lhes realizadas provas de susceptibilidade diante dos antibióticos. Os resultados se analisaram com estatística descritiva. Resultados: 252 (52%) quartos não apresentaram nenhum tipo de reação ao CMT, nem signos clínicos de mastite, razão pela qual foram considerados livres da doença. Dos quartos, 73 (15%) foram positivos para CMT e cultivo bacteriológico. Destes se isolaram 36 cepas de ECN (7,4% do total de quartos); S. aureus-ECP, 28 (5,8%); Streptococcus spp., 6 (1,2%); Escherichia coli, 2 (0,4%), e Klebsiella pneumoniae, 2 (0,2%). A mastite clínica e subclínica no quarto se apresentaram em 1,4% e 13,6%, respectivamente. Em 5 (1,0%) dos quartos se encontrou mastite clínica causada por ECN e mastite subclínica em 31 (6,4%). Em 61% das cepas de ECN foram resistentes à penicilina, e o 58%, à tetraciclina; o 97% foram sensíveis à cefoperazona. Conclusão: o grupo ECN, considerado um emergente mundial de mastite, é evidenciado com alta frequência em fazendas de gado do Tolima, na Colômbia, o que causa mastite clínica e subclínica com variada resposta aos antimicrobianos.

Effects of intramammary infection on whey proteinograms of sheep during lactation / Efeitos da infecção intramamária no proteinograma de ovinos durante a lactação

The study aimed to identify potential biomarkers of mammary gland infection in Santa Inês sheep. Commercial flocks of sheep provided the same hygiene, sanitary, and nutritional management under semi-intensive production systems were monitored during the lactation stage-and assessed 15, 30, 60, and 90 days after delivery (through the end of lactation and weaning). The California Mastitis Test (CMT) was performed on the mammary glands. Milk was collected for bacterial examination and protein analysis. Bacterial culture and biochemical characterization of the samples were performed. Forty-two milk samples from healthy glands (negative CMT and bacterial testing) and 43 milk samples from infected glands (positive CMT and bacterial testing) taken at the predefined time points were assessed. A rennin solution was used to obtain the whey. The proteins analysis was performed using sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), which allowed for the quantification of nine whey proteins produced in healthy glands: serum albumin, lactoferrin, IgA, IgG heavy-chain (IgG HC), IgG light-chain (IgG LC), total IgG (IgG HC + IgG LC), α-lactalbumin, β-lactoglobulin, protein with MW 15.000 Da, protein with MW 29.000 Da and eleven whey proteins secreted by infected glands, including haptoglobin and α-1-acid glycoprotein...

Este estudo teve como objetivo identificar potenciais biomarcadores de infecção na glândula mamária de ovelhas Santa Inês. Foram monitorados rebanhos comerciais de ovinos, submetidos ao mesmo manejo higiênico-sanitário e nutricional, criados em sistemas de produção semi-intensivo durante as várias fases de lactação e avaliados aos 15, 30, 60 e 90 dias após o parto (até o final da lactação e desmame). Realizou-se o California Mastit Test (CMT). O leite foi coletado para análise bacteriana e análise de proteínas. Foi realizada a cultura bacteriana e a caracterização bioquímica das amostras. Foram selecionadas 42 amostras de leite provenientes de glândulas sadias (CMT negativo e teste bacteriológico negativo) e 43 amostras de leite de glândulas infectadas (CMT positivo e teste bacteriológico positivo). O soro lácteo foi obtido por meio da adição de renina. A proteína total no soro lácteo foi mensurada utilizando o método do biureto e a identificação das proteínas empregando-se eletroforese em gel de poliacrilamida com dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE), permitindo a quantificação de nove proteínas no soro lácteo das glândulas sadias: albumina, lactoferrina, IgA, IgG de cadeia pesada (IgG CP), IgG de cadeia leve (IgG CL), a IgG total (IgG CP+ IgG CL), α-lactalbumina, β-lactoglobulina, proteína de PM 15.000 Da, proteína de PM 29.000 Da. No soro das glândulas infectadas foram identificadas onze proteínas, incluindo além das citadas acima a haptoglobina e α-1 glicoproteína ácida...

Efeito do tamanho e localização de rebanhos da raça holandesa sobre a contagem de células somáticas do leite / Effect of herd's size and geographical location on somatic cell count of milk from Holstein cows

Oitenta e cinco rebanhos da raça holandesa sob controle oficial de lactação tiveram seus índices de Contagem de Células Somáticas analisados no período de março de 2009 a fevereiro de 2010. As coletas foram realizadas mensalmente durante este período, perfazendo um total de 1.020 amostras. Os rebanhos foram classificados de acordo com a localização geográfica no estado de Minas Gerais e número de vacas em lactação. Os dados de CCS foram transformados para escore linear e, então, as médias comparadas por análise de variância, utilizando-se o programa estatístico SPSS. Em relação à localização do rebanho, não houve diferença significativa quanto à variação da CCS (p>0,05). Quanto a variação de CCS em relação ao tamanho do rebanho, foi observado que aqueles com um número maior de vacas em lactação (de 21 a 40 e acima de 80) tiveram índices menores de CCS (p<0,05) que os com um número menor de vacas em lactação (até 20).

Phenotypic and genotypic characterization of Streptococcus uberis isolated from bovine subclinical mastitis in Argentinean dairy farms

The aim of this study was to investigate the phenotypic and genotypic characteristics of Streptococcus uberis isolated from subclinical mastitis (SCM) cases, and to examine the possible association between both characteristics. A total of 32 S. uberis were isolated from 772 quarter milk samples (SCM > 250,000 cells/ml) collected from 195 cows selected randomly from 18 dairy farms located in Argentina. The S. uberis strains were characterized phenotypically by the presence of virulence factors as plasminogen activator factor (PAF), hyaluronidase (HYA), capsule (CAP) and CAMP factor, and were further characterized genotypically by pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). S. uberis strains expressed plasminogen activator factor, hyaluronidase or capsule (65.5 %, 56.3 %, 59.4 %, respectively), but only 25 % of isolates were CAMP factor positive. Thirteen different virulence profiles were identified on the basis of the combination of virulence factors. Eighteen PFGE patterns with 90% of similarity were identified among 32 S. uberis. A great diversity of virulence profiles and PFGE patterns were present among dairy farms. S. uberis strains with the same PFGE pattern showed different virulence profiles. Bovine S. uberis strains causing SCM included in the present study showed heterogeneity in regard to their phenotypic and genotypic characteristics, and the PFGE patterns are not associated with the virulence profiles.

Caracterización fenotípica y genotípica de Streptococcus uberis aislados de mastitis bovina subclínica en tambos de Argentina. El objetivo de este estudio fue investigar las características fenotípicas y genotípicas de Streptococcus uberis aislados de casos de mastitis subclínica (MSC) y examinar la posible asociación entre ambas características. Un total de 32 cepas de S. uberis fueron aisladas de 772 muestras de leche de cuartos mamarios (MSC > 25 0000 células/ml) colectadas de 195 vacas seleccionadas al azar pertenecientes a 18 tambos lecheros localizados en Argentina. Las cepas de S. uberis fueron caracterizadas fenotípicamente sobre la base de la presencia de factores de virulencia tales como el factor activador del plasminógeno (FAP), la hialuronidasa (HIA), la cápsula (CAP) y el factor CAMP. Además, fueron caracterizadas genotípicamente por electroforesis de campos pulsados (PFGE). Las cepas de S. uberis expresaron el factor activador del plasminógeno, la hialuronidasa o la cápsula (65,5 %, 56,3 % y 59,4 %, respectivamente), pero solo el 25 % fueron CAMP positivas. Sobre la base de la combinación de los factores de virulencia se identificaron 13 perfiles de virulencia diferentes. Asimismo, se identificaron 18 patrones de PFGE con un 90 % de similitud entre las 32 cepas de S. uberis. Se presentó una gran diversidad de perfiles de virulencia y patrones de PFGE entre los tambos. Cepas con el mismo patrón de PFGE presentaron perfiles de virulencia diferentes. Las cepas de S. uberis causantes de MSC en bovinos incluidas en el presente estudio mostraron heterogeneidad con respecto a sus características fenotípicas y genotípicas, y los patrones de PFGE no estuvieron asociados con los perfiles de virulencia.

Suscetibilidade a antimicrobianos e produção de betalactamase em amostras de Staphylococcus isolados de mastite caprina no semiárido paraibano / Susceptibility to antimicrobial drugs and production of beta-lactamase by Staphylococcus strains isolated from mastitis in goats in the semi-arid region of Paraiba state, Brazil

Este trabalho teve como objetivo avaliar a susceptibilidade antimicrobiana in vitro e a produção de betalactamase de 42 amostras de Staphylococcus isolados de mastite subclínica caprina. Foram utilizados 14 Staphylococcus chromogenes, 10 S. waneri, 6 S. saprophyticus, 5 S. aureus, 3 S. epidermidis, 2 S. intermedius e 2 Staphylococcus coagulase negativo. Os maiores índices de resistência foram para penicilina 66,67% e ampicilina 63,89% e sensibilidade frente a cefoxitina 97,62%. A múltipla resistência a 3 ou mais antimicrobianos foi observada em 42,86% dos isolados. Das 42 amostras de Staphylococcus avaliadas, 73,81% foram positivas para o teste de produção de betalactamase. A concentração inibitória mínima apresentou 100% das amostras susceptíveis à norfloxacina e os valores de resistência para os demais antimicrobianos não ultrapassaram os 30%. A alta resistência apresentada para penicilina e ampicilina demonstra a limitação no uso desses antimicrobianos no tratamento da mastite caprina na região. Embora neste estudo as cefalosporinas tenham apresentado boa sensibilidade, o uso desses fármacos em medicina veterinária se torna preocupante devido à incidência de estirpes produtoras de betalactamase.

The present study was aimed to test the in vitro antimicrobial susceptibility using disc diffusion assay and minimum inhibitory concentration (MIC) values, as well as the production of beta-lactamase of 42 strains of Staphylococcus sp. isolated from subclinical mastitis in goats in the semi-arid region of Paraiba state, in Brazil. To this end, 14 samples of negative Staphylococcus chromogenes, 10 S. waneri, 6 S. saprophyticus, 5 S. aureus, 3 S. epidermidis, 2 S. intermedius and 2 Staphylococcus were used. Regarding the in vitro susceptibility, the highest levels of resistance observed concerned penicillin (66.67%) and ampicillin (63.89%), and the greatest sensitivity observed concerned Cefoxitin (97.22%). Multiple resistance to 3 or more antimicrobial drugs was observed in 42.86% of the isolates. Of the total Staphylococcus isolated, 73.81% were positive for the beta-lactamase production test. The minimum inhibitory concentration showed 100% of the samples susceptible to norfloxacin, and the maximum resistance values to the other antimicrobial drugs were 30%. According to the results obtained, it is concluded that, in order to select the most appropriate drug to treat mastitis in goats caused by strains of Staphylococcus, the antimicrobial sensitivity profile of the strain must be known and routine laboratory tests for detecting beta-lactamase should be performed because these enzymes are disseminated both in human and veterinary medicine. The high resistance to penicillin and ampicillin demonstrates the limitation in the use of antibiotics in the treatment of mastitis in goats. Although in the present study the cephalosporines demonstrated a considerable degree of sensitivity, the use of these antimicrobial agents in veterinary medicine becomes a matter of concern due to the incidence of strains that produce betalactamase.